全世界约有四分之一人有曾感染过乙型肝炎病毒 (HBV) ，3. 5 亿人成为慢性携带者。尽管已有 HBV 疫苗和抗病毒治疗药物的产生，但乙肝仍是严重威胁人类健康的传染病。

目前 HBV 确切的致病机理仍不清楚，一个重要的原因是缺乏理想的乙型肝炎动物模型。因此构建一个合适的动物模型不仅有利于对其感染机制进行研究，也有助于研发更加有效的治疗药物。

今天小欧就常见的几种 HBV 动物模型为大家讲解一下造模方法以及特点。

 

鸭 DHBV 模型

鸭乙型肝炎病毒的基因组、复制方式和发病机制与人乙型肝炎病毒相似,且鸭乙肝病毒的天然宿主容易获得、价格低廉、感染成功率高,因此鸭乙型肝炎动物模型已被广泛应用于药物筛选、药理学和病理学研究。

造模机制乙型肝炎病毒主要通过血液和血制品传播，采用 HBV 患者血清或 HBV DNA，经静脉注射或采用水动力高压注射方式注射到动物体内。

造模方法将鸭乙型肝炎病毒(DHBV)经静脉注射、肌内注射、腹腔注射、肝内注射和鸭胚静脉注射方式注射到鸭体内。鸭感染 DHBV 后的病毒血症与鸭龄成相关性，DHBV 的感染时机是影响感染率及预后的重要因素。

1 日龄鸭腹腔注射感染 DHBV 后，2 周后阳性率为 89％ 左右，4 周后可达 94％ 左右，并持续 22 周。而 10 日龄感染后，2 周后阳性率仅 16％ 左右，4 周后 38％ 左右，6 周后可达 61.1％，12 周后，约 1/2 的 DHBV 阳性鸭表现为 DHBsA9 及 DHBV DNA 转阴。

优点：鸭 DHBV 的基因组结构及 复制方式与 HBV 相似；鸭 DHBV 可造成鸭肝纤维化和坏死，是一种评估临床前期抗病毒药物治疗效果的良好模型。

缺点：DHBV 与 HBV 在结构上有较大差 别，如 DHBV 基因组结构缺乏 X 基因，其极少诱发肝癌。

土拨鼠 WHV 模型

土拨鼠肝炎病毒(WHV)于 1978 年美国费城动物园患肝癌的土拨鼠中首次被发现，因其基因组结构､复制周期与 HBV 高度近似，被归类为嗜肝 DNA 病毒｡WHV 感染土拨鼠后的自然史与 HBV 感染人高度近似，因此土拨鼠模型很早就被用于乙肝 DNA 疫苗、抗 HBV 药物的评价｡

造模机制：与 HDV 相同。

造模方法对土拨鼠进行颈外静脉注射感染土拨鼠肝炎病毒。

成年土拨鼠 WHV 感染 后慢性化率低于 5% ，而幼年土拨鼠 WHV 感染的慢性化率可达 60%~75%。此外，土拨鼠急性 WHV 感染被清除后，其肝脏内仍能检出痕量的 WHV DNA 及残存的炎症反应，这可能是急性乙肝感染恢 复后仍不能完全避免 HCC 发生的原因 。

优点：WHV 与 HBV 同源性高;土拨鼠感染 WHV 后，可成慢性感染并发展成肝癌。

缺点：WHV 与 HBV 在分类、结构和生物学功能等方面不完全相同，使其在感染机制及复制过程中存在差异。

人源化嵌合体小鼠模型  研究者将人的肝细胞移植到免疫缺陷小鼠体内，使之在小鼠体内生长并逐渐形成一种人鼠嵌合肝脏，HBV 可以在这个动物模型中人肝细胞中存活，成为人源化小鼠乙肝动物模型。

造模机制要制备人源化小鼠乙肝动物模型，前提条件是要建立人源化模型的小鼠是免疫缺陷鼠，通过人工诱导，比如辐射处理，或本身就是自发突变的免疫缺陷鼠，如 SCID 小鼠。

造模方法NOD/SCID 小鼠 HBV 模型：将人肝细胞(4×1000000)与基质胶混合，移植到小鼠肾被膜下。前 57 天，每两周静脉注射 50 μg c-Met 抗体。用 α1 抗胰蛋白酵素水平来评价人肝细胞生长情况。然后接种 HBV，并检测 HBsA9 和 HBV-DNA。 

优点：可直接感染 HBV；可用于研究不同突变和不同基因型 的 HBV 株。

缺点：不能用于人类免疫细胞和 HBV 相互作用的的免疫反应及导致肝脏疾病的研究。

HBV 转基因小鼠模型 
目前为止，已建立多种 HBV 相关转基因小鼠模型，为研究 HBV 的致病机制提供了有力的研究工具。迄今为止，根据其所选用的目的基因的不同，大体可以分三种类型。

造模机制1、HBV 部分片段的转基因小鼠模型将所选用的 HBV 各基因片段连接在 HBV 调节序列或外源性启动子等下游，显微注射后所建立的转基因小鼠。
2、HBV 全长序列转基因小鼠模型 1988 年 Farza 等通过显微注射头尾相连的二聚体 HBV-DNA 得到一只有病毒复制和病毒蛋白合成的小鼠，但其肝脏无病理改变。
3、HBV 超长序列的转基因小鼠模型，1995 年 Guidotti 等在 HBV 全长序列 5’末端重复一个 C 和 X 基因及其增强子，形成长 4096bp 的 HBV 超长序列(1．3 基因组当量)，通过受精卵显微注射法获得了 3 个品系的高水平基因表达和复制的转基因小鼠。

由于篇幅所限，这里将应用较为广泛的 Tg(Alb1HBV)44Bri 做一介绍。

造模方法在小鼠表达 HBV 大包膜蛋白(large envelope protein)基因。

优点：可在小鼠肝细胞内，形成完整的病毒颗粒；HBV 复制水平与慢性乙肝患者相似。

缺点：HBV 抗原在小鼠胚胎期便持续性存在，产生免疫耐受，不能用于 HBV 免疫病理变化的研究。

水动力法转染 HBV 小鼠模型  利用携带 1.3 拷贝 DHBV 的腺病毒尾静脉接种小鼠， 模型成功建立后 , 可从模型小鼠中分离的血清可以有效地感染原代鸭肝细胞，证明了 DHBV 可以跨越种属屏障 , 在小鼠肝脏中复制和表达相关蛋白。这也突破了以往利用 HBV 转基因小鼠，不能再细胞内检测到 HBV cccDNA 的局限性。

这也为探索在不同品系的小鼠 、不同剂量以及更长的观察时间下 rAAV8-1.3HBV 介导 HBV 基因组复制和表达以及引起乙型肝炎的病理变化 , 并应用于 HBV 慢性持续感染的机制研究与药物及疫苗评价奠定了基础。

造模机制基于 AAV8 病毒的肝脏高亲嗜性特点，制备并纯化了携带 1.3 拷贝 HBV 基因组的重组8 型腺相关病毒 rAAV8-1.3HBV , 随后经尾静脉注射到具有正常免疫功能的 C57BL/6 小鼠体内，将所携带的  HBV 基因组高效导入肝细胞中，以期获得 HBV 持续感染的小动物模型。

造模方法构建可高效表达 HBV 基因组的重组腺病毒相关病毒载体 pZAC2.1-HBV。利用尾静脉水动力注射法将含 1.2 拷贝 HBV 基因组的 AAV 载体质粒的方法注入小鼠。其表达水平随重组病毒注射剂量的增加而升高，高剂量注射时可造成超过 40% 的肝细胞感染 HBV， 血清中 HBV DNA 可达 10 的 5 次方以上。

C57BL/6 小鼠 注射 rAAV8-1.3HBV 后 , 用 ELISA 法分别检测第 1 、2 、3 、4 、5 、6 、10 周后小鼠血清(1 :4 倍稀释)中 HBsAg 、HBeAg 和 HBV DNA 的水平, 结果分别如下图所示：
 

血清 HBV 的 DNA 含量 

 血清 HBV 的 S 抗原含量

 

血清 HBV 的 e 抗原含量

优点：造模成本低，可形成记性 HBV 感染小鼠的状态。

缺点：不能模拟慢性 HBV 感染的病程。

乙肝模型考核指标

检测乙肝动物模型成功的考核指标应当稳定、可靠，所检测的方法应该灵敏性高、特异性高。

动物血清中的 HBsAg、HBeAg、HBeAb 和 HBV DNA 分别是检测乙肝病毒的重要指标，也是评估动物模型制备成功与否的关键。

吉妮欧生物目前正为广大科研工作人员提供动物实验检测项目，帮助其科研发展。其中，关于动物模型乙肝肝炎检测项目如下：

 

 

                                                      

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